| Identifikační kód |
RIV/68081707:_____/18:00492062 |
| Název v anglickém jazyce |
Effective scheme of photolysis of GFP in live cell as revealed with confocal fluorescence microscopy |
| Druh |
J - Recenzovaný odborný článek (Jimp, Jsc a Jost) |
| Poddruh |
J/A - Článek v odborném periodiku je obsažen v databázi Web of Science společností Thomson Reuters s příznakem „Article“, „Review“ nebo „Letter“ (Jimp) |
| Jazyk |
eng - angličtina |
| Vědní obor |
10608 - Biochemistry and molecular biology |
| Rok uplatnění |
2018 |
| Kód důvěrnosti údajů |
S - Úplné a pravdivé údaje o výsledku nepodléhající ochraně podle zvláštních právních předpisů. |
| Počet výskytů výsledku |
2 |
| Počet tvůrců celkem |
4 |
| Počet domácích tvůrců |
2 |
| Výčet všech uvedených jednotlivých tvůrců |
Eva Bártová (státní příslušnost: CZ - Česká republika, domácí tvůrce: A, vedidk: 4873130)
Petra Řezníčková (státní příslušnost: CZ - Česká republika, domácí tvůrce: A, vedidk: 2231794)
Y.I. Glazachev (státní příslušnost: RU - Ruská federace)
D. Y. Orlova (státní příslušnost: US - Spojené státy americké) |
| Popis výsledku v anglickém jazyce |
We proposed an effective kinetics scheme of photolysis of green fluorescent protein (GFP) observed in live cells with a commercial confocal fluorescence microscope. We investigated the photolysis of GFP-tagged heterochromatin protein, HP1 ss-GFP, in live nucleus with the pulse position modulation approach, which has several advantages over the classical pump-and-probe method. At the basis of the proposed scheme lies a process of photoswitching from the native fluorescence state to the intermediate fluorescence state, which has a lower fluorescence yield and recovers back to native state in the dark. This kinetics scheme includes four effective parameters (photoswitching, reverse switching, photodegradation rate constants, and relative brightness of the intermediate state) and covers the time scale from dozens of milliseconds to minutes of the experimental fluorescence kinetics. Additionally, the applicability of the scheme was demonstrated in the cases of continuous irradiation and the classical pump-and-probe approach using numerical calculations and analytical solutions. An interesting finding of experimental data analysis was that the overall photodegradation of GFP proceeds dominantly from the intermediate state, and demonstrated approximately the second-order reaction versus irradiation power. As a practical example, the proposed scheme elucidates the artifacts of fluorescence recovery after the photobleaching method, and allows us to propose some suggestions on how to diminish them. |
| Klíčová slova oddělená středníkem |
proteins;frap;binding |
| Stránka www, na které se nachází výsledek |
- |
| DOI výsledku |
10.1088/1478-3975/aab31e |
| Odkaz na údaje z výzkumu |
- |